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荧光定量引物长度

1、引物长度一般为15-30bp,常用的为18-27bp 2、引物GC含量一般为40%-60%,以45-55%为宜,上下游引物GC含量和Tm值要保持接近; 3、引物所对应的模板序列的Tm值最好在72℃左右,至少要在55-80℃之间,Tm值曲线以选取72度附近为佳,5'到 3’的下降形...

实时定量的引物设计要求比较高,可以按普通引物设计的方法来做,但是设计时要注意扩增的片段不能太大,最好在250bp-100bp之间。同时要保证这对引物有绝对的特异性,因为要是产生非特异性扩增的话,就不能准确的计量模板量了,这样就失去了实时定...

可以用于正式实验的引物必须满足以下条件: a 溶解曲线单峰,窄而尖,否则可能有非特异性扩增;峰的位置横坐标一般在80度以上,这个温度为PCR产物的解链温度,如果在75度附近,可能是引物二聚体,miRNA染料法检测时,溶解曲线的峰的位置可能在75...

部分,长度在250bp左右,不能太长,不然扩增效率会影响实验结果。

引物 荧光定量PCR 是利用荧光定量PCR 仪(如ABI 7500、stepone、ROChe LightCycler、Bio-Rad CFX96 等)通过实时追踪 PCR 每一步循环的荧光信号 值来达到对起始模板量的定量分析。一次成功的荧光定量 PCR 反应除了需要稳 定的仪器、优质的 Taq ...

参照以下real-time PCR引物设计原则: 1.最好位于编码区5’端的300-400bp区域内,可以用DNAman,Alignment 软件看看结果. 2.产物不能形成二级结构(自由能小于58.61KJ/mol). 3.引物长度一般在17-25碱基之间,上下游引物不能相差太大. 4.G+C含量在40...

150bp?不知道具不具有普遍性。

(转载,仅供参考) a) 针对双标记探针的引物和探针设计的规则 所选序列应该高度特异。应该选择具有最小二级结构的扩增子。这是很重要的,因为二级结构会影响反应效率。在任何实时应用中期望获得100%的扩增反应效率,这意味着每次循环中,体系内...

1、查找该物种或近缘物种信息,看是否能确定内含子序列的位置,在CDS上设计跨内含子的引物,以避免基因组污染; 2、扩增片段大小最好在200bp左右,太大会影响扩增效率; 3、最好一次分别设计两条上游(距离较近)和下游引物(距离较近),组合成...

选取 目标片段长度在80-250bp的引物,在回头BLAST,特异性良好的话就可以了,一般我会多设计几个,选取最好的那个~

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